一、原理
DNS定糖法即二硝基水杨酸比色定糖法，其原理是在碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系，通过比色法可测定还原糖含量。
二、试剂及配制
1、DNS试剂：称取6.3克DNS溶于少量水中，移入100ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液26.2ml，再加苯酚5克和无水硫酸钠182克，搅拌溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000ml，摇匀，贮于棕色瓶中，室温放置7天后使用，有效期半年。
2、葡萄糖标准溶液：精确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2mg/ml。
三、操作步骤
1、制作葡萄糖标准曲线
分别取葡萄糖标准液（2mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml。
分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。
在540nm波长下测定吸光度。
以葡萄糖(mg)含量为横坐标、A540值为纵坐标，画出工作曲线。
2、样品测定
样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml。
沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。
从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数，进而求出样品中糖含量。
四、相关问题解答
1、萃取剂对DNS定糖法测得的糖分含量的影响：不同的萃取剂可能会对DNS定糖法产生不同的影响，有些萃取剂可能会与DNS试剂或还原糖发生相互作用，从而影响反应的正常进行和最终的测定结果，某些有机溶剂可能会溶解或破坏DNS试剂中的有效成分，或者与还原糖形成复合物，导致测定的糖分含量不准确，在使用DNS定糖法时，需要根据具体的萃取剂选择合适的处理方法，如通过预处理去除萃取剂的干扰，或者选择不受萃取剂影响的测定方法等。
2、DNS定糖法与邻甲苯胺法相比，具有哪些优势：DNS定糖法具有以下优势：一是准确性较高，该方法是半微量定糖法，操作简便、快速、杂质干扰较少；二是显色稳定性相对较好，在实验过程中只要控制好显色条件，就能获得较好的重复性结果；三是适用范围广，可用于多种还原糖的测定。
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