一、产品简介
1、定义:DNS试剂,又称3,5二硝基水杨酸法或简称DNS法,是植物总糖和还原糖检测(硝基水杨酸法)的成分之一,定量检测植物组织样品中的总糖和还原糖的含量。
2、用途:DNS试剂主要用于科研领域,在生化试验中可用于还原糖含量的测定,也可用于生物质中半纤维素含量的测定,它们均需与标准葡萄糖曲线进行比对。
二、配制方法
以下是几种常见的DNS试剂配制方法:
1、农业部标准法:称取3,5二硝基水杨酸3.15g(化学纯),加水500mL,搅拌5秒,水浴至45℃,然后逐步加入100mL 0.2g/mL的氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,直到溶液清澈透明,注意加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃,再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g,继续45℃水浴加热,同时补加水300mL,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解,停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000mL,用烧结玻璃过滤器过滤,取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存,室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月。
2、轻工业部标准法:称取3,5二硝基水杨酸(10±0.1)g,置于约600mL水中,逐渐加入氢氧化钠10g,在50℃水浴中搅拌溶解,再依次加入酒石酸甲钠200g、苯酚(重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g,待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000mL,过滤,贮存于棕色试剂瓶中,于暗处放置710d后使用。
3、Ghose法:甲液将6.9g结晶苯酚溶于15.2mL 10%NaOH溶液,蒸馏水稀释至69mL,在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠,乙液将255g酒石酸钾钠溶于300mL 10%NaOH溶液中,再加入880mL 1%的3,5二硝基水杨酸溶液,将甲乙二溶液混合即得黄色试剂,储于棕色瓶中放置710d后使用。
三、使用方法
1、将样本DNA溶液与DNS试剂混合,加热至沸,冷却后加入乙醇和醋酸钠溶液。
2、加入新配制的氨基联氨溶液,混匀后静置片刻。
3、加入甲醛溶液,混匀后静置30分钟至1小时。
4、用紫外可见分光光度计测定580nm处的吸光度值,根据标准曲线计算出样本中DNA的浓度。
四、注意事项
1、避免试剂与手接触,因为DNS试剂具有强腐蚀性,如果皮肤接触请立即用大量水冲洗。
2、DNS试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降,尽量避光保存。
3、在稀释盐酸和氢氧化钠溶液时,应小心操作,避免伤人。
4、如果待测样本不能及时测定,应置于28℃保存,3天内稳定。
5、如果样品还原糖浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
6、已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内,以防止试剂的再次污染。
五、相关问题与解答
1、DNS试剂可以用于哪些类型的样本?
答:DNS试剂主要用于植物组织样品中的总糖和还原糖检测,但也可以用于其他含有还原糖的样本,如食品、饮料等。
2、DNS试剂的储存条件是什么?
答:DNS试剂应储存在棕色瓶中,避光保存,不同配制方法的DNS试剂有不同的储存条件和有效期,具体请参考相应的配制方法说明。
DNS试剂是一种重要的生物化学试剂,其准确配制和规范使用对于实验结果的准确性至关重要,在使用DNS试剂时,务必遵循相关的操作规程和注意事项,以确保实验的安全和有效性。
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