DNS试剂,全称为3,5二硝基水杨酸试剂,是一种常用于测定还原糖含量的试剂,以下是关于DNS试剂配制的详细内容:
一、DNS试剂的重要性
DNS试剂在生物化学和分子生物学实验中扮演着重要角色,特别是在还原糖含量的测定方面,由于其高灵敏度和稳定性,DNS法成为了许多实验室的首选方法。
二、DNS试剂的配制方法
1、甲液的制备:
将6.9克结晶苯酚溶解于15.2毫升10%的氢氧化钠溶液中,随后用蒸馏水稀释至69毫升。
在此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
2、乙液的制备:
将255克酒石酸钾钠溶于300毫升10%的氢氧化钠溶液中。
再加入880毫升1%的3,5二硝基水杨酸溶液。
3、甲乙混合液的制备:
将甲液和乙液混合,即得到黄色的DNS试剂。
此试剂需储于棕色瓶中,放置710天后使用,有效期为一年。
4、轻工业部标准DNS试剂的配制:
称取3,5二硝基水杨酸(精确至±0.1克)置于约600毫升水中。
逐渐加入10克氢氧化钠,并在50℃水浴中磁力搅拌溶解。
依次加入200克酒石酸甲钠、2克重蒸苯酚和5克无水亚硫酸钠。
待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000毫升,过滤后贮存于棕色试剂瓶中,暗处放置7天后使用。
5、农业部标准DNS试剂的配制:
称取3.15克化学纯的3,5二硝基水杨酸,加水500毫升,搅拌5秒后水浴至45℃。
逐步加入100毫升0.2克/毫升的氢氧化钠溶液,同时不断搅拌。
直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃)。
再逐步加入91.0克四水酒石酸钾钠、2.50克苯酚和2.50克无水亚硫酸钠。
继续在45℃水浴加热,同时补加水300毫升,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解。
停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000毫升。
用烧结玻璃过滤器过滤后储存在棕色瓶中,避光保存,室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月。
三、注意事项
1、操作顺序:在配制过程中,3,5二硝基水杨酸和氢氧化钠的加入时间必须接近,或者先加入氢氧化钠,以避免产生难溶的沉淀。
2、温度控制:配制过程中,溶液的温度不宜超过50℃,否则可能导致溶液颜色变黑或产生絮状沉淀。
3、储存条件:DNS试剂应储存在棕色瓶中,避光保存,以延长其使用寿命。
四、问题与解答
1、为什么DNS试剂要避光保存?
DNS试剂中的一些成分(如苯酚)对光敏感,长时间暴露在阳光下会导致试剂变质或失效,为了保持试剂的稳定性和准确性,需要将其储存在棕色瓶中并避光保存。
2、如何确保DNS试剂的配制准确无误?
严格按照上述步骤进行配制,确保所有药品的称量准确无误。
使用高质量的化学试剂和纯净的蒸馏水。
在配制过程中注意控制温度和搅拌速度,以确保所有成分充分溶解并混合均匀。
最后进行过滤处理以去除可能存在的杂质或未溶解的颗粒物。
来源互联网整合,作者:小编,如若转载,请注明出处:https://www.aiboce.com/ask/144016.html