1、DNS法测还原糖原理
反应原理：DNS法，即二硝基水杨酸法，是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系，通过比色法测定反应液在特定波长下的吸光度，进而计算出样品中的还原糖含量。
适用范围：DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中，因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性。
2、DNS试剂的制备
成分：DNS试剂主要由3,5二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、苯酚和亚硫酸钠组成。
制备步骤：将6.3克3,5二硝基水杨酸和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成DNS试剂，贮于棕色瓶中放置一周后备用。
3、标准曲线的绘制
准备葡萄糖标准液：预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重，准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用，若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
绘制标准曲线：分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度，以葡萄糖含量（mg/ml）为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样品测定
样品处理：样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0mg/ml。
显色反应：取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度。
吸光度测定：在540nm波长下测定吸光度，从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数，求出样品中糖含量。
相关问题与解答
1、为什么DNS法适合用于多糖水解产生的多种还原糖体系的测定？
答：因为DNS方法显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，在多糖水解产生的多种还原糖体系中，无论还原糖的具体种类如何，只要它们具有还原基团，就能与DNS试剂发生反应并产生颜色变化，从而可以通过比色法进行测定。
2、DNS试剂需要现配现用吗？
答：不需要，DNS试剂可以储存在棕色瓶中备用，但需要注意的是，新配制的DNS试剂需要放置一周后方可使用，这是因为新配制的DNS试剂中的某些成分可能需要一定时间来充分混合和稳定。
来源互联网整合，作者：小编，如若转载，请注明出处：https://www.aiboce.com/ask/155699.html
