DNS法，即二硝基水杨酸法，是一种常用的还原糖测定方法，以下是关于DNS还原糖测定的详细内容：
一、实验原理
在碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系，可通过比色法测定还原糖含量。
二、试剂制备
1、DNS试剂：将6.3克3,5二硝基水杨酸和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成DNS试剂，贮于棕色瓶中放置一周后备用。
2、葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。
三、操作步骤
1、制作标准曲线：分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml，分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度，以葡萄糖含量（mg）为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定：样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度，从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数，求出样品中糖含量。
四、注意事项
1、DNS试剂应现配现用，配制过程中注意避免接触皮肤和吸入其粉尘。
2、沸水浴加热时需严格控制时间和温度，确保反应条件一致。
3、比色测定时，应在规定时间内完成吸光度的测量，以保证结果的准确性。
4、本方法适合用于多糖水解产生的多种还原糖体系中还原糖的测定，对还原糖的种类无选择性。
五、相关计算
1、根据标准曲线回归方程计算样品中还原糖的含量，若回归方程为(y = ax + b)（(y)为吸光度，(x)为葡萄糖浓度），测得样品的吸光度为(A)，则样品中还原糖浓度(x=(A b)/a)（单位：mg/ml）。
2、按照以下公式计算样品中还原糖的含量：(还原糖含量(%)=frac{C×V}{W×1000}×100%)，(C)为还原糖浓度（mg/ml），(V)为样品提取液体积（ml），(W)为样品质量（g）。
六、问题与解答
1、为什么DNS法适合用于多糖水解产生的多种还原糖体系的测定？
答：因为DNS法显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，多糖水解后会产生多种还原糖，DNS法可以准确地测定其中的还原糖总量，不受具体还原糖种类的影响。
2、DNS试剂为什么要现配现用？
答：DNS试剂不稳定，长时间放置会影响其测定效果，现配现用可以保证试剂的活性和准确性，从而获得可靠的测定结果。
来源互联网整合，作者：小编，如若转载，请注明出处：https://www.aiboce.com/ask/189270.html
