DNS试剂,它是如何改变现代生物实验的?

DNS试剂(3,5二硝基水杨酸)是一种用于测定还原糖的化学试剂,通过与还原糖反应生成棕红色化合物,颜色深浅与还原糖含量成正比。

项目
中文名 DNS试剂
贮于 棕色瓶中
保存条件 室温
配置温度 溶液加热温度不宜超过50摄氏度

配制标准

Ghose法

1、甲液:将6.9 g结晶苯酚溶于15.2 mL 10% NaOH溶液,蒸馏水稀释至69 mL,在此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠。

2、乙液:将255 g酒石酸钾钠溶于300 mL 10% NaOH溶液中,再加入880 mL 1%的3,5二硝基水杨酸溶液。

3、混合:将甲乙二溶液混合即得黄色试剂,储于棕色瓶中放置710天后使用,在棕色瓶内保存一年有效。

轻工业部标准

1、称取原料:称取3,5—二硝基水杨酸(10±0.1) g,置于约600 mL水中,逐渐加入氢氧化钠10 g,在50℃水浴中搅拌溶解,再依次加入酒石酸钾钠200 g、苯酚(重蒸)2 g和无水亚硫酸钠5 g。

2、冷却定容:待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000 mL,过滤,贮存于棕色试剂瓶中,于暗处放置7天后使用。

3、有效期:室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月。

农业部标准

1、称取原料:称取3,5二硝基水杨酸3.15 g(化学纯),加水500 mL,搅拌5秒,水浴至45℃,然后逐步加入100 mL 0.2g/mL的氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,直到溶液清澈透明。

2、加入其他成分:再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0 g、苯酚2.50 g和无水亚硫酸钠2.50 g,继续45℃水浴加热,同时补加水300 mL,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解,停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000 mL,用烧结玻璃过滤器过滤。

3、储存:取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存,室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月。

试剂用途

1、还原糖含量测定:DNS试剂常用于生化试验中,通过与还原糖发生氧化还原反应,生成棕红色产物,其颜色深浅与还原糖含量成比例关系。

2、半纤维素含量测定:也可用于生物质中半纤维素含量的测定,需与标准葡萄糖曲线进行比对。

注意事项

1、显色原理:在碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3氨基5硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系。

2、储存条件:DNS试剂应贮于棕色瓶中,室温保存,避光,配制时溶液加热温度不宜超过50摄氏度。

3、有效期:不同配制方法的DNS试剂有效期可能有所不同,一般为6个月至1年不等。

相关问题与解答

1、DNS试剂的配制过程中为什么要控制温度不超过50摄氏度?

答案:因为在高温下,DNS试剂中的主要成分容易析出,影响试剂的稳定性和使用效果,控制温度在50摄氏度以下可以避免这种情况的发生。

2、DNS试剂在测定还原糖含量时,为什么选择在540nm波长下测定吸光度?

答案:因为在540nm波长下,DNS试剂与还原糖反应生成的棕红色产物具有最大的吸光度值,能够更准确地反映还原糖的含量。

DNS试剂是一种重要的生化试剂,广泛应用于还原糖和总糖含量的测定,在配制和使用过程中,需要严格控制温度和时间,确保试剂的稳定性和准确性,了解DNS试剂的显色原理和储存条件对于正确使用该试剂至关重要。

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