DNS法(二硝基水杨酸法)是一种用于测定还原糖含量的化学分析方法。它通过二硝基水杨酸与还原糖在碱性条件下反应生成有色化合物,利用比色法测定其吸光度,从而间接计算出还原糖的含量。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等特点,广泛应用于食品、生物、化工等领域的还原糖检测。
原理
DNS法,即二硝基水杨酸法,是一种用于测定还原糖含量的经典方法,其基本原理是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3氨基5硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内,颜色深浅与还原糖含量成比例关系,通过比色法,可以测定样品中的还原糖含量。
试剂制备
1、DNS试剂:将6.3克3,5二硝基水杨酸和262毫升2摩尔/升氢氧化钠溶液混合,加入到含有182克四水合酒石酸钾钠的热水溶液中,再向其中加入5克苯酚和5克亚硫酸钠,搅拌溶解后冷却并定容至1000毫升,贮于棕色瓶中备用。
2、葡萄糖标准液:通常使用1毫克/毫升的葡萄糖标准液。
标准曲线绘制
分别取葡萄糖标准液(1毫克/毫升)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0毫升于试管中,用蒸馏水补足至1毫升,然后分别加入DNS试剂2毫升,沸水浴加热2分钟,流水冷却后用水补足至15毫升刻度,在540纳米波长下测定吸光度,以葡萄糖毫克数为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。
样品测定
样品液适当稀释,使糖浓度为0.11.0毫克/毫升,取稀释后的糖液1.0毫升于15毫升刻度试管中,加入DNS试剂2毫升,沸水煮沸2分钟,冷却后用水补足至15毫升刻度,在540纳米波长下测定吸光度,从标准曲线查出葡萄糖毫克数,求出样品中糖含量。
注意事项
1、DNS法适合多糖水解产生的多种还原糖体系,因其对还原糖的种类没有选择性。
2、实验过程中应确保试剂和样品的准确性及操作的规范性,以保证测定结果的可靠性。
相关问题与解答
问题一:DNS法是否适用于所有类型的还原糖?
答案:DNS法适用于多糖水解产生的多种还原糖体系,因其对还原糖的种类没有选择性,但需要注意的是,非还原糖如蔗糖不适用于此方法。
问题二:DNS法在测定过程中有哪些可能影响结果准确性的因素?
答案:可能影响结果准确性的因素包括试剂配制的准确性、样品稀释的合理性、加热时间的控制、吸光度测定的准确性等,实验过程中还应注意避免杂质干扰和操作误差。
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