DNS比色法是一种用于测量溶液中特定物质浓度的实验方法，通过比较待测样品与标准溶液的颜色差异来确定其浓度。这种方法基于比尔朗伯定律，即光在通过一定浓度的溶液时会被吸收，吸收程度与溶液浓度成正比。
3，5－二硝基水杨酸（DNS）比色法是一种用于测定还原糖含量的常用方法，该方法因其简便、快速和高灵敏度等特点而被广泛应用于生物化学和食品科学领域，通过DNS比色法，可以测定样品中的还原糖含量，并进一步判断酶对淀粉等多糖的水解效果。
实验原理
在碱性条件下，3，5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系，可以通过比色法测定样品中的还原糖含量。
化学反应方程式如下：
[ text{C}_7text{H}_4text{N}_2text{O}_7 + text{RCHO} rightarrow text{C}_7text{H}_5text{NO}_6 + text{RCOOH} + text{NH}_3 ]
RCHO代表还原糖，RCOOH代表相应的糖酸。
试剂制备
1、DNS试剂：将6.3克3,5二硝基水杨酸和262毫升2摩尔/升氢氧化钠溶液，加入到含有182克酒石酸钾钠的500毫升热水溶液中，接着加入5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容至1000毫升，贮于棕色瓶中放置一周后备用。
2、葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5克，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000毫升。
3、其他试剂：包括6摩尔/升盐酸、碘碘化钾溶液、6摩尔/升氢氧化钠和0.1%酚酞指示剂。
标准曲线制作
1、分别取葡萄糖标准液（1毫克/毫升）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0毫升于15毫升试管中。
2、用蒸馏水补足至1.0毫升，然后分别准确加入DNS试剂2毫升。
3、沸水浴加热2分钟，流水冷却，用水补足到15毫升刻度。
4、在540纳米波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
样品测定
1、样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0毫克/毫升。
2、取稀释后的糖液1.0毫升于15毫升刻度试管中，加DNS试剂2.0毫升。
3、沸水煮沸2分钟，冷却后用水补足到15毫升刻度。
4、在540纳米波长下测定吸光度，从标准曲线查出葡萄糖毫克/毫升数，求出样品中糖含量。
问题与解答
1、DNS比色法的主要优点是什么？
答：DNS比色法的主要优点是操作简便、反应快速、灵敏度高，适用于多种还原糖体系的测定。
2、DNS比色法的实验原理是什么？
答：DNS比色法的实验原理是在碱性条件下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系。
3、如何制备DNS试剂？
答：将6.3克3,5二硝基水杨酸和262毫升2摩尔/升氢氧化钠溶液，加入到含有182克酒石酸钾钠的500毫升热水溶液中，再加入5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容至1000毫升，贮于棕色瓶中放置一周后备用。
来源互联网整合，作者：小编，如若转载，请注明出处：https://www.aiboce.com/ask/59949.html
